Pruebas de identificación

Reactivos

Agua

Solución de tripsina al 1,4%
Etanol al 50%,
Etanol absoluto o de 96%.
Solución amortiguadora de fosfatos con gelatina

Identificación de Clostridium botulinum.

- Quitar el exceso de aire disuelto en los tubos preparados con medio caldo carne cocida (CMM) y caldo glucosa peptona tripticasa extracto de levadura (TPGY), mediante calentamiento en baño de agua a ebullición por 10 minutos y enfriar antes de usarlos.

-Asegurarse de que las tapas de los tubos estén flojas al hacer este proceso.

-Agregar a los tubos de TPGY 1,5 ml de una solución de tripsina al 1,4%.

-Mezclar suavemente y marcar con una T (TPGYT). A los tubos de CMM marcarlos con 1 y 2; marcar con  3 y 4 a los tubos con TPGYT.

-Colocar aproximadamente 1 g de inóculo a cada uno de los tubos 1 a 3.

-Calentar el tubo No. 2 en baño de agua a 75ºC por 20 minutos para seleccionar esporas resistentes al calor.

-Suspender aproximadamente 1 g del inóculo en un volumen de 10 a 20 mL de solución de etanol al 50%, o mezclar el inóculo, cuando la muestra es líquida 1:1 con etanol absoluto o de 96%.

-Mantener las suspensiones o mezclas a temperatura ambiente por 60 minutos.

-Centrifugar a 14000 x g durante 15 minutos, y pasar el sedimento al tubo No. 4.

-Incubar los tubos a 35ºC por 24 horas y a 30ºC por 4 días.

-Centrifugar aproximadamente 10 ml de cultivo a 15000 x g durante 20 minutos.

-Esterilizar el sobrenadante por filtración a través de membranas de 0,45 mm, con ayuda de una jeringa desechable.

-Diluir el filtrado 1:5 con solución amortiguadora de fosfatos con gelatina.