Tinciones para la evaluación de morfología microscópica

El Clostridium botulinum es una bacteria Gram positiva, anaerobia que tiene forma de varilla y se desarrollan mejor en condiciones de poco oxígeno. Las bacterias forman esporas que les permiten sobrevivir en un estado latente hasta ser expuestas a condiciones que puedan sostener su crecimiento y estas se presentan de forma ovalada subterminal y deformante. Es móvil por flagelos  peritricos, no produce cápsula y es proteolíco y lipolítico.

Para evaluar la presencia de este microorganismo se realizará un frotis a partir de la muestra obtenida, tomando el inóculo en condiciones de esterilidad y colocándolo en el frotis, fijándolo (dependiendo del tipo de muestra que se toma, ya sea líquida o sólida). Por disposición de la norma oficial mexicana NOM-129-SSA1-1995 Si el alimento contiene exceso de grasa, sumergir los portaobjetos fijados al calor por 1-2 minutos en xilol antes de teñir. 

Después de estar seco el frotis se colocará el colorante cristal violeta por 30 segundos sobre el frotis, seguido de lavar el colorante con agua destilada. 

Después de esto se adicionan dos gotas de Lugol por otros treinta segundos, lavándolo con agua destilada. 

Siguiente a esto se lava el colorante en exceso con alcohol-cetona hasta que deje de escurrir el colorante y se lava con agua destilada. 

Finalmente se colocan dos gotas de safranina durante 30 segundos y se lava el frotis con agua destilada.

Al observar al microscopio se debe observar una estructura como la descrita en la imagen, así como el color violeta definido por el cristal violeta:

Gram positiva vista al microscopio